Condiții de bază pentru cultura celulară
1. Mediu de cultură celulară adecvat
Un mediu adecvat de cultură celulară este una dintre cele mai importante condiții pentru creșterea și proliferarea celulelor in vitro. Mediul de cultură nu numai că oferă nutriție celulară și substanțe de bază pentru a promova creșterea și proliferarea celulelor, dar oferă, de asemenea, un mediu de viață pentru creșterea și reproducerea celulelor cultivate.
2. Ser de înaltă calitate
În prezent, cele mai multe medii sintetice necesită adăugarea de ser. Serul este una dintre cele mai importante componente din mediul de cultură celulară, conținând o varietate de factori de creștere și alți nutrienți necesari pentru creșterea celulelor.
3. Temperatura constantă de creștere a celulelor
Pentru a menține creșterea viguroasă a celulelor cultivate, trebuie să existe o temperatură constantă și adecvată.
4. Mediu gazos adecvat
Gazul este una dintre condițiile necesare pentru supraviețuirea celulelor mamiferelor, iar gazele necesare sunt în principal oxigenul și dioxidul de carbon.
5. Temperatura culturii celulare
Pentru a menține creșterea viguroasă a celulelor de cultură, trebuie să existe o temperatură constantă și adecvată. Diferite tipuri de celule au cerințe diferite pentru temperatura culturii. Temperatura standard pentru cultura celulară umană este de 36,5 °C ± 0,5 °C. Abaterea de la acest interval de temperatură va afecta metabolismul normal al celulelor și chiar va muri.
6. Mediu gazos adecvat
Gazul este una dintre condițiile necesare pentru supraviețuirea culturii celulare de mamifere, iar gazele necesare sunt în principal oxigenul și dioxidul de carbon. Oxigenul participă la ciclul acidului tricarboxilic, producând energie pentru creșterea și proliferarea celulelor și sintetizând diferite componente necesare pentru creșterea celulelor.
Contaminarea comună a culturii celulare
1. Contaminarea bacteriană
Contaminarea bacteriană este cea mai frecventă. Odată ce operația este ușor improprie, aceasta va provoca contaminarea celulelor. După contaminarea bacteriană, va apărea ca benzi subțiri negre de nisip atunci când sunt observate la microscop. În formă de tijă etc. În al doilea rând, mediul de cultură devine galben și tulbure, iar sedimentele fine în formă de nisip pot fi văzute clar în vasul Petri și există un miros ciudat din când în când.
2. Contaminarea fungică
Soluția de cultură contaminată cu fungici este clară și transparentă, nu ca un focar mare de infecție bacteriană, deci este dificil să o detectați din timp. Uneori arată ca un filament sub microscop, alteori arată ca un coral și încet va crește un filament negru foarte subțire. Acest lucru Când este prea târziu, este dificil ca celulele să fie salvate.
3. Contaminarea mucegaiului
În concordanță cu infecțiile fungice, deoarece mediul de cultură este clar, contaminarea fungică este dificil de detectat devreme, când este adesea prea târziu. Impuritățile floculente au apărut încet în mediul de cultură, iar obiectele plutitoare cu masă filamentoasă au putut fi văzute sub microscop, ca niște catkins în vânt. Celulele pot crește în continuare, dar în timp, celulele se deteriorează și se opresc din creștere.
4. Infecția cu micoplasmă
Mediul de cultură devine tulbure. După ce micoplasma infectează celulele, modificările citopatice nu sunt evidente, dar starea celulară se înrăutățește și creșterea încetinește. Pot exista mici pete negre sub microscop, dar mediul de cultură nu este, în general, tulbure. După ce celulele au fost trecute, au apărut pete negre intercelulare, celulele au fost vacuolate și multe celule semănau cu apoptoza și necroza. În cele din urmă, celulele au plutit și au murit complet.
Prevenirea contaminării celulare
Stabilirea unor reguli și reglementări bune poate contribui mult la reducerea contaminării celulelor. Inclusiv sistemul de acces, normele de operare și sistemul de management zilnic.
Sistem de acces: inclusiv personal și materiale. Personalul trebuie să fie instruit înainte de a putea funcționa singur și trebuie să îndeplinească cerințele de purtare înainte de a intra în laborator, cum ar fi halate albe, halate de izolare, măști, mănuși etc. Pentru articolele necesare, articolele de unică folosință ar trebui să fie strict sterilizate și sterilizate, iar articolele achiziționate trebuie achiziționate de pe canale regulate și fiabile. Celulele nou achiziționate trebuie testate și verificate înainte de utilizare.
Specificații de funcționare: Cel mai bine este să formulați specificații pentru operațiile de rutină, iar personalul de laborator trebuie să respecte specificațiile de funcționare, care nu pot fi modificate după bunul plac, și, de asemenea, să cultive obiceiuri bune de funcționare pentru personalul de laborator. De exemplu, după ce vârful pipetei este aspirat, acesta nu va fi extins în mediu pentru a doua oară și o cantitate suficientă de mediu va fi aspirată o dată. La adăugarea lichidului, lichidul trebuie adăugat în suspensie cât mai mult posibil, ceea ce poate preveni în mod eficient contaminarea cu micoplasmă și contaminarea încrucișată a celulelor. În plus, dacă este posibil, operați doar o singură linie celulară la un moment dat și este mai bine să aveți un interval de timp mic între celule pentru a evita contaminarea încrucișată.
Sistem zilnic de management: Include reguli și metode pentru utilizarea, curățarea și întreținerea mediului și a consumabilelor, reactivilor etc. Există, de asemenea, gestionarea consumului, inventarierea și achiziționarea de reactivi și consumabile, inclusiv gestionarea inventarului pe două niveluri al probelor celulare. Pentru sursele de contaminare care nu sunt ușor de găsit, cel mai bine este să efectuați teste regulate, în principal contaminarea cu micoplasmă și contaminarea încrucișată a celulelor.
BKMAM Bio furnizeaza consumabile corespunzatoare pentru cultura celulara:
Vase rotunde/pătrate din plastic de unică folosință:
Material de polistiren de înaltă transparență (PS);
Suprafața este netedă și plană și nu există nici o distorsiune optică a celulelor sub observație microscop;
Designul stivuirii face stivuirea și stocarea mai ușoară;
Sterilizarea cu oxid de etilenă (EO);
Rezistența la uzură și coroziune.
Tratamentul aderent al felurilor de mâncare de cultură celulară:
Material de polistiren (PS);
Sterilizarea cu fascicul de electroni, fără pirogen, fără toxină;
Tratament de suprafață cu plasmă în vid, aderență celulară excelentă;
Suprafața este netedă și plană și nu există nici o distorsiune optică a celulelor sub observație microscop;
Designul care poate fi stivuit face ca stivuirea și stocarea să fie mai ușoare.
Plăci de cultură celulară din plastic:
Material de polistiren (PS);
Potrivit pentru cultura celulară normală, tip de placă de tratament neadenta;
Fără pirogen, fără toxină, sterilizat;
Ambalaj independent ușor de tip lacrimă, ușor de utilizat;
Tratamentul aderent al plăcilor de cultură celulară:
Material de polistiren (PS);
Tratamentul aderenței (tratamentul TC) tip placă, potrivit pentru cultura celulelor aderente;
Fără pirogen, fără toxină, sterilizat;
Ambalaj independent ușor de tip lacrimă, ușor de utilizat;
Toate sunt funduri plate.
Tratarea aderență a baloanelor de cultură celulară:
Material de polistiren (PS);
Sterilizarea cu fascicul de electroni, fără pirogen, fără toxină;
Tratament de suprafață cu plasmă în vid, aderență celulară excelentă;
Acoperire respirabilă, care este propice schimbului de gaze și împiedică trecerea microorganismelor.
Crioviale de spin interne/externe:
Material de polipropilenă 100% pur (PP);
Poate rezista la sterilizare 15psi, 121°C;
Peretele tubului este îngroșat, iar corpul tubului are scară și zonă de scriere;
Există o etanșare inel de silicon între firul de acoperire țeavă și corpul țevii pentru a asigura etanșeitate;
Fără DNase, fără RNase, fără pirogen, fără endotoxină.
